血常規(guī)是醫(yī)院常作的檢查項目，但是由于大部分的醫(yī)院用的都是三分類的血球儀（五分類血球儀價格太高），在分析上存在一定的缺陷，而血涂片則能在一定程度上很好的補償，使得三分類的血球儀也能起到五分類的效果。而且血涂片的作用還不僅于此，它還能更直觀的放映細(xì)胞的形態(tài)，以及血液的一種狀態(tài)?，F(xiàn)在就血涂片的制作和應(yīng)用做一個介紹。

血涂片的制作：

血涂片的制作方法很多，但需要的材料也都是一樣的，載玻片和（或）蓋玻片?，F(xiàn)在介紹一種我們醫(yī)院常用的涂片方法：

1、首先左手持一載玻片，將采到的血（做血常規(guī)剩下的血）滴一滴到載玻片一端：

血涂片

2、右手持一蓋玻片作為推片，成30-45度角于血滴前方靠近血滴

血涂片

3、右手移動蓋玻片使其一端與血液接觸

血涂片

4、右手持蓋玻片往前推動，速度不能太慢，保證血液均勻的被推開

血涂片

5、做好的血涂片

血涂片

5、血涂片做好后需要風(fēng)干，之后就可以進(jìn)行染色，盡管每個醫(yī)院所用染色液可能不一樣，但基本的方法都一致，也可以根據(jù)染色液的說明進(jìn)行具體操作，我們醫(yī)院用的是diff-quick染液。

染好的片子就需要在顯微鏡下觀察，一般我們會從低倍鏡開始觀察，再逐次轉(zhuǎn)換為高倍鏡甚至油鏡。

。 細(xì)胞分類計數(shù)器

一般情況下，我們會在顯微鏡下找到一個合適的視野開始計數(shù)，按照一定的方向順序來數(shù)白細(xì)胞，而這個視野的選著會很重要，在做血涂片的時候血涂片上通常會有三條帶，中間的那一條帶就是我們觀察的區(qū)域，鏡下會顯示細(xì)胞既不重疊也不太稀疏。然后我們會把數(shù)的100個白細(xì)胞記錄下來并分類，并分別記下各類細(xì)胞所占的比例。

細(xì)胞分類計數(shù)器

　?。?xì)胞分類計數(shù)器）

通過這樣的方法，我們就可以得到白細(xì)胞下各個種類的比例，結(jié)合血常規(guī)的白細(xì)胞數(shù)目就可以得到一個五分類的項目，這對于分析動物的身體狀況更加的全面和科學(xué)。如上圖的結(jié)果是：嗜中性粒細(xì)胞百分比：70%（分葉：57%，桿狀：13%）；淋巴性細(xì)胞百分比：25%；單核細(xì)胞百分比：3%；嗜酸性粒細(xì)胞百分比：2%；嗜堿性粒細(xì)胞百分比：0。

再簡單舉例說一下血涂片在臨床上的應(yīng)用，也是結(jié)合血常規(guī)的分析。如下圖為一只犬的血常規(guī)結(jié)果：

從結(jié)果上看，RBC(紅細(xì)胞)下降，HGB(血紅蛋白)下降，HCT（紅細(xì)胞壓積）下降。很明顯的可以判定為貧血。但是貧血也分很多種的，到底是否為再生性，又或者是否是出血或溶血造成的。然后根據(jù)血涂片可以知道：

從該血涂片我們可以看到，紅細(xì)胞中間淡然區(qū)明顯擴大，說明了這是正紅細(xì)胞低色素性貧血，也就是由于缺鐵性貧血，需要補充鐵元素，增強營養(yǎng)。一方面我們知道動物的具體情況，可以針對性的幫助解決問題。

當(dāng)然，血涂片在臨床上的作用不僅僅如此，我們不僅可以用來來計數(shù)分類白細(xì)胞，還可以觀察紅細(xì)胞的形態(tài)來判斷如果出現(xiàn)異性紅細(xì)胞的原因，白細(xì)胞形態(tài)異常的原因，還可以看到血液寄生蟲如：巴貝斯焦蟲，血吸蟲的微絲蚴。而且對于血常規(guī)儀器還可以起到一種驗證的作用，就是說如果血常規(guī)的結(jié)果與你在顯微鏡下看到的結(jié)果出入較大的時候，如果你保證你血涂片的制作和觀察都沒問題的話，就要懷疑機器的判讀有問題了。比喻抽血過程比較慢，導(dǎo)致血凝的出現(xiàn)而使得機器讀書的血小板極低，以及由于貓的血小板和紅細(xì)胞體積較近而出現(xiàn)的判讀等都可以用血涂片來糾正和驗證。

小編還為您整理了以下內(nèi)容，可能對您也有幫助：

如何制作干血涂片?

2．血涂片的制作（見圖1、2、3）

（1）用75％酒精棉球消毒手指尖，待酒精干后，操作者以左手把取血者手指捏緊，右手用消毒針在取血手指上刺一

傷口

，深約2毫米，以干棉球擦去第一滴血，輕按取血者手指，待

血液

成滴，沾

一滴血

在干凈

載玻片

右端。

（2）另取一邊緣光滑平齊的

玻片

作為

推片

，推片與載片約成20～30°，并與血滴接觸，使血滴在玻片邊緣散開，迅速將玻片推向左方。

（3）作成一均勻和

厚度

適中的血涂片。

（4）染色

Giemsa染色。先將已干的

血片

放入甲醇

固定液

內(nèi)固定10～15分鐘，取出待干，然后放入染色液內(nèi)20分鐘，再取出，用水迅速沖洗至血膜呈粉紅色，待干即可觀察。

注意：

①

取血滴不宜過多，以免

涂片

過厚，影響觀察。

②

要使涂片厚薄均勻、拿片角度和速度都要適中，用力要均勻。

③

涂片一般在后半部為好，

白細(xì)胞

在邊緣

和尾端較多。

血涂片的制作步驟

血涂片的制作步驟如下：

1、用毛細(xì)吸管吸取EDTA抗凝的外周血5-7UL，或者直接采集患者末梢血，將血滴滴至載玻片的一端約1CM處或整片的3/4端。有磨砂片的玻片，可在接近磨砂頭的部位來水反復(fù)沖洗，然后擦干備用。

2、左手持載玻片，右手持玻片，將推片接近血滴處，然后輕輕接觸血滴并壓在血滴上，使血液呈“￣”字型展開，充滿推片寬度。

3、將推片與載玻片形成30度夾角，用均勻的速度將血向載玻片的另一端推動。紅細(xì)胞壓積發(fā)生變化時，應(yīng)適當(dāng)?shù)恼{(diào)整推片與載玻片的角度以及推動血液是的速度。標(biāo)準(zhǔn)的血涂片應(yīng)做到頭、體、尾分明，兩邊和兩端留有空隙。

染色方法

1、瑞氏-吉姆薩混合染色能集合瑞氏染色與吉姆薩染色的優(yōu)點。

2、染色方法：標(biāo)記血涂片，將血涂片平放在染色架上，滴加A液覆蓋整個血膜，30秒-1分鐘后，滴加B液，將A、B液混勻，可用洗耳球輕吹液面，A、B液的比例為1:2，靜置水平位置染色5-10分鐘后，將載玻片拿起，輕輕晃動，使染料不再附著于血膜上。

把水流調(diào)至最小，平持載玻片，與水流方向呈90度，在血膜頭部沖入，向血膜的尾端調(diào)整玻片的角度，直至染料沖干凈，沖洗干凈后的血涂片，放置在血片架上將水自然控干，或傾斜玻片等待自然干燥。

人血涂片的制作方法

血涂片-實驗材料、試劑

3.1實驗材料：醫(yī)用采血針、酒精棉球、載玻片、血推片、消毒牙簽

3.2實驗試劑：瑞氏染液、抗B血清、抗A血清、生理鹽水、蒸餾水

3.3儀器設(shè)備：Motic光學(xué)顯微鏡

血涂片-實驗步驟 聽語音

4.1ABO血型鑒定

4.1.1取一塊清潔玻片，用記號筆標(biāo)上記號。

4.1.2用小滴管吸A型標(biāo)準(zhǔn)血清（抗B）一滴加入左側(cè)，用另一小滴管吸B型標(biāo)準(zhǔn)血清（抗A）一滴加入右側(cè)

4.1.3以穿刺法自左手無名指指尖取血，在玻片的每側(cè)各放入一小滴血，用牙簽攪拌，使每側(cè)抗血清和血液混和。每邊用一支牙簽，切勿混用。

4.1.4靜置室溫下10—15min后，觀察有無凝集現(xiàn)象，并據(jù)此判斷血型。

4.2血涂片的制作及血細(xì)胞觀察

4.2.1取末捎血一滴置于玻片的一端,左手持載玻片,右手以邊緣平滑的推片的一端從血滴前方后移接觸血滴，血滴即沿推片散開。然后便推片與載片夾角保持30-45度平穩(wěn)地向前移動,載片上保留下一薄層血膜

4.2.2血涂片制成后可手持玻片在空氣中揮動,使血膜迅速干燥,以免血細(xì)胞皺縮.

4.2.3用蠟筆在血膜兩側(cè)劃線,以防染液溢出,然后將血膜平放在染色架上.加瑞氏染液2-3滴,使覆蓋整個血膜,固定0.5-1.0分鐘.滴加等量或稍多的新鮮蒸餾水,與染料混勻染色5-10分鐘.

4.2.4用清水沖去染液,待自然干燥后或用吸水紙吸干,即可置血涂片于顯微鏡下進(jìn)行鏡檢。

4.2.5白細(xì)胞分類計數(shù)。

選擇涂片的體尾交界處染色良好的區(qū)域,在油鏡下計數(shù)100個紅細(xì)胞,按其形態(tài)特征進(jìn)行分類計數(shù),求出各類細(xì)胞所占比值。

如何用顯微鏡檢驗血液，制作涂片

血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，臨床上應(yīng)用極為廣泛，制備厚薄適宜，分布均勻，染色良好的血涂片是血液學(xué)檢查的重要基本技術(shù)之一。

涂片法制片是生物顯微制片的基本方法之一。

步驟：

可分5個步驟進(jìn)行

消毒→取血→推片→染色→觀察

消毒與取血

消毒

先按摩取血部位，使血流通暢；再用酒精消毒采血針和取血部位（如指尖）。

取血

待酒精干后，刺破皮膚，使血自然流出，勿擠。取干凈載片，讓血滴在離載片一端中4～5毫米處，注意手指持握載片的邊緣，勿觸及其表面。不能使載片接觸取血部位的皮膚。

推片

取一塊邊緣光滑的載片做推片。將其一端置于血滴前方，向后移動到接觸血滴，使血液均勻分散在推片與載片的接觸處。然后使推片與載片呈30°～40°角，向另一端平穩(wěn)地推出，如右圖所示。涂片推好后，迅速在空氣中搖，使之自然干燥。

染色

用特種玻璃鉛筆在血膜兩側(cè)畫兩條線，防止染液外溢。再將瑞氏染液(伊紅-亞甲基藍(lán))滴在血膜上，至染液淹沒全部血膜，染半分鐘。加等量蒸餾水(或緩沖液)與染液混合再染5分鐘。最后用蒸餾水把染液沖掉，用吸水紙吸干，自然干燥后，即可觀察。

觀察

紅細(xì)胞

淡紅色，無核的圓形細(xì)胞，因紅細(xì)胞為雙凹形，故邊緣部分染色較深，中心較淺，直徑7-8微米。

顆粒白細(xì)胞

嗜中性顆粒白細(xì)胞：體積略大于紅細(xì)胞，細(xì)胞核被染成紫色分葉狀，可分1-5葉。直徑10-12微米。

嗜酸性顆粒白細(xì)胞：略大于嗜中性白細(xì)胞，細(xì)胞核染成紫色，通常為2葉，胞質(zhì)充滿嗜酸性大圓顆粒，被染成鮮紅色。直徑10-15微米。

嗜堿性顆粒白細(xì)胞：體積略小于嗜酸性白細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)中有大小不等被染成紫色的顆粒，顆粒數(shù)目較嗜酸性白細(xì)胞的顆粒少，核1-2葉，染成淡藍(lán)色。直徑10-11微米。